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CRISPR-Cas9

Alt-R CRISPR-Cas9系统

Alt-R CRISPR-Cas9系统

Cas9核酸内切酶需要CRISPR RNA(crRNA)来指定靶序列,crRNA和反式激活crRNA(tracrRNA)结合先形成指引RNA(gRNA),随后与核酸内切酶构成有编辑功能的核糖核蛋白复合物,即(Ribonucleoprotein complex,RNP).靶序列DNA切割后,通过非同源末端连接(Non-homologous end-joining,NHEJ)或同源重组(Homology directed recombination,HDR)修复从而产生序列变异。 Alt-R CRISPR-Cas9系列产品为基因编辑研究提供了简单优化且使用方便的工具。

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CRISPR-Cas9 crRNA

CRISPR-Cas9 crRNA

Alt-R CRISPR-Cas9 系统将gRNA分成位点特异性的crRNA和序列通用型的tracrRNA两部分,并对天然形式的crRNA和tracrRNA 序列进行优化,将天然形式的crRNA缩短至36个碱基,Alt-R tracrRNA缩短至67个碱基

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CRISPR-Cas9 tracrRNA

CRISPR-Cas9 tracrRNA

由于天然的tracrRNA较长(含有89个碱基),合成时不仅复杂而且费用高。因此IDT考虑将tracrRNA缩短,同时考察crRNA与tracerRNA在不同长度时的编辑效率。结果表明36个碱基crRNA与67个碱基tracrRNA组合时效率高。同时,67个碱基的tracrRNA与89个碱基相比成本更低,因此降低了客户的使用成本。此外,还可以通过化学修饰使其具有核酸酶抗性。

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CRISPR-Cas9 sgRNA

CRISPR-Cas9 sgRNA

负责将Cas9蛋白质引导到基因组靶标位置到gRNA可以有多种形式,目前大范围应用的形式是将sgRNA导入到质粒中或以双链DNA为模版进行体外转录形成sgRNA。

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Cas9 Nuclease

Cas9 Nuclease

天天彩票下载app 重组S. pyogenes Cas9核酸酶,纯化自大肠杆菌菌株。经密码子优化,含有1个N端的NLS、2个C端的NLS和一个C端6-His标签。

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Cas9 Nickase

Cas9 Nickase

天天彩票下载app 重组S. pyogenes Cas9切口酶,纯化自大肠杆菌菌株。经密码子优化,含有1个N端的NLS、2个C端的NLS和一个C端6-His标签。 Alt-R S.p. Cas9 D10A Nickase 3NLSc在DNA的靶向链上产生单链切割; Alt-R S.p. Cas9 H840A Nickase 3NLS 在非靶向链上产生单链切割。

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