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5’ Nuclease Assay for qPCR

天天彩票下载app 探针法与嵌合荧光法相比特异性高,而且无需绘制熔解曲线或对 PCR 后的样品进行电泳,可以说是基因表达分析中最精准的方法。5’ nuclease 探针,可与各种报告染料组合使用,这些组合与各式 qPCR 仪器兼容。

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5’ Nuclease Assay for qPCR

产品简介

探针法与嵌合荧光法相比特异性高,而且无需绘制熔解曲线或对 PCR 后的样品进行电泳,可以说是基因表达分析中最精准的方法。5nuclease 探针,可与各种报告染料组合使用,这些组合与各式 qPCR 仪器兼容。
5’ nuclease assay
是定量基因表达研究的金标准。Assay 包括正、反向引物和水解探针。与 SYBR® 嵌合式染料法不同,当靶序列被扩增时,双标记探针通过荧光信号来保证特异性。

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常见染料・淬灭剂对应表

*除备注外,图表中荧光染料均免许可费从IDT订购。

† 荧光基团为6-FAM, TET, HEX, JOE,淬灭基团为Black Hole Quencher®-1BHQ®-1,用于诊断使用时需要第三方许可) 的探针也可获得。

‡ 仅用于作referenceIDT暂不提供此服务。

§ATTO荧光染料探针可从IDT官网的Custom DNA Oligos页面订购。

IIBlack Hole Quencher-2 (BHQ-2) 也可被用于作为淬灭剂。但用于诊断使用时需要第三方许可。

¶ Cy 5 可与传统的单淬灭基团 Iowa Black RQ (免专利费)或BHQ-2(用于诊断使用时需要第三方许可)组合。 

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5'Nuclease Assay·双淬灭探针

IDT的“双淬灭”系统能够降低荧光背景噪音实现高信噪比。目前,传统5’核酸酶探针包括5’端荧光染料和3’端淬灭剂, 长度约20–30碱基。但在双淬灭系统中,会在5’端第9个碱基和第10个碱基间追加ZEN或TAO淬灭剂。由此,探针内的淬灭效应会变得更强,从而使背景显著降低。另外,针对需设计较长探针的AT富集区,利用ZENTMTAOTM内部淬灭剂,也可以设计出有效的探针。

图1. 5'Nuclease Assay 双淬灭探针图示。

双淬灭探针的背景更低


                                      图2                                                                                 图3

图2. 对比单淬灭探针体系(绿色Cy® 5 / BHQ2,紫色Cy® 5 / IBRQ),双淬灭探针体系(蓝色Cy® 5 / TAO™ /IBRQ)的背景显著降   低。

图3. 对比单淬灭探针体系(绿色Cy® 5 / BHQ2,紫色Cy® 5 / IBRQ) ,双淬灭探针体系(蓝色Cy® 5 / TAO™ /IBRQ)的assay 灵敏度 显著增强。

双淬灭探针的特点

•        即使增加探针长度,ZENTM双淬灭探针仍维持低背景

•        ZENTM双淬灭探针,无论长短探针均有较高淬灭效率

•        即使针对AT富集区域,也可得到有效的探针设计


图4. 与单淬灭探针相比,双淬灭探针(FAM / ZEN™ /IBRQ,深蓝色)的背景信号对探针长度不敏感。

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